İçindekiler:

Bir gen bir plazmide nasıl eklenir?
Bir gen bir plazmide nasıl eklenir?

Video: Bir gen bir plazmide nasıl eklenir?

Video: Bir gen bir plazmide nasıl eklenir?
Video: Plazmid DNA izolasyonu - M.B.G Teknikleri 2024, Kasım
Anonim

Temel adımlar şunlardır:

  1. kes aç plazmit ve "yapıştır" gen . Bu işlem, kısıtlama enzimlerine (DNA'yı kesen) ve DNA ligazına (DNA'ya katılan) dayanır.
  2. Sokmak NS içine plazmit bakteri.
  3. çok büyümek plazmit -bakterileri taşımak ve onları protein yapmak için "fabrikalar" olarak kullanmak.

Ayrıca, bir gen bir plazmit GCSE'ye nasıl yerleştirilebilir?

bu bir plazmide yerleştirilmiş ligaz enzimlerini kullanır. NS plazmit gitmek içine bir bakteri hücresi. transgenik bakteri çoğalır, sonuç olarak içinde insan insülini üreten milyonlarca özdeş bakteri.

Ek olarak, bir geni nasıl alt klonlarsınız? için Temel Adımlar alt klonlama Ekinizi ana vektörden serbest bırakır ve arındırırsınız, bu eki hazırlanmış bir hedef vektöre bağlarsınız, bu ligasyon reaksiyonunu yetkin bakteri hücrelerine dönüştürürsünüz. Ardından, ek için dönüştürülmüş hücreleri tararsınız.

Bunu göz önünde bulundurarak, gen klonlamanın 4 adımı nedir?

Klasik restriksiyon enzimi sindirimi ve ligasyon klonlama protokollerinde, herhangi bir DNA parçasının klonlanması temelde dört adımı içerir:

  • ilgilenilen DNA'nın (veya hedef DNA'nın) izolasyonu,
  • ligasyon,
  • transfeksiyon (veya transformasyon) ve.
  • bir tarama/seçim prosedürü.

Bir plazmidi nasıl amplifiye edersiniz?

Deneysel prosedür

  1. PCR'yi çalıştırın ve PCR ürününü saflaştırın: İnsert DNA'nızı yükseltmek için PCR'yi çalıştırın.
  2. DNA'nızı sindirin:
  3. Jel saflaştırma ile ekinizi ve vektörünüzü izole edin:
  4. Ekinizi vektörünüze bağlayın:
  5. Dönüşüm:
  6. Bitmiş Plazmidi İzole Edin:
  7. Plazmidinizi Sıralayarak Doğrulayın:

Önerilen: