İçindekiler:

Klonları nasıl seçersiniz?
Klonları nasıl seçersiniz?

Video: Klonları nasıl seçersiniz?

Video: Klonları nasıl seçersiniz?
Video: Bilim Adamları Tarafından Başarıyla Klonlanan 10 Hayvan 2024, Kasım
Anonim

Ne zaman seçme a klon , köklerin güçlü, beyaz ve yetiştirme ortamından hevesle çıkıntılı olduğundan emin olun. Kökler kahverengi ve buruşmuşsa veya başka bir şekilde hareketsiz görünüyorsa, geri koyun ve daha iyisini arayın.

Ayrıca, tek bir hücreyi nasıl klonlarsınız?

  1. 200 μL ortam içeren 96 kuyulu bir plakanın ilk kuyusuna (A1) ~16, 000 hücre koymak için hücreleri sayın.
  2. A1 içeren hücrelerden 100 µL çıkarın ve 100 µL'yi çıkarmadan ve C1 ile karıştırmadan önce iyice karıştırmak için 3x yukarı ve aşağı pipetleme yaparak B1 ile karıştırın.

Ayrıca, bir memeli hücre kolonisini nasıl seçersiniz? Farklılaşmamış sağlıklı seçmek için plakayı mikroskop altına yerleştirin. koloniler . Koloni seç 10ul'ye ayarlanmış bir P-20 pipet kullanarak. Dikkatlice seçmek a koloni bozmadan koloni tek hücreler , ve tripsin ile 96 oyuklu bir plakaya aktarın. Dağıtmak için birkaç kez yukarı ve aşağı pipetleyin. koloni.

Buna uygun olarak, bir klon silindirini nasıl kullanıyorsunuz?

kullanma steril orta forseps, bir klonlama silindiri . düz tabanına hafifçe bastırın. silindir pürüzsüz silikon yağına dökün ve ani dikey hareketle çıkarın. Düzgün yapılırsa, bu, yağın alt kısımda eşit dağılımını sağlayacaktır. silindir . Yı kur silindir bir koloninin üzerinde.

Stabil hücre hatları için kolonileri nasıl seçersiniz?

Stabil hücre hatları oluşturma protokolü, aşağıda gösterildiği gibi birkaç adım gerektirir:

  1. Optimum seçim antibiyotik konsantrasyonunu belirlemek için bir öldürme eğrisi oluşturun.
  2. İstenen plazmit yapı(lar)ı ile hücreleri transfekte edin
  3. Stabil poliklonal kolonileri seçin ve genişletin.
  4. Sınırlı seyreltme ve genişletme ile tek klonları tanımlayın.

Önerilen: