İçindekiler:

Sekanslamadan önce PCR ürünlerini saflaştırmak neden gereklidir?
Sekanslamadan önce PCR ürünlerini saflaştırmak neden gereklidir?

Video: Sekanslamadan önce PCR ürünlerini saflaştırmak neden gereklidir?

Video: Sekanslamadan önce PCR ürünlerini saflaştırmak neden gereklidir?
Video: PCR ürünü saflaştırma 2024, Kasım
Anonim

İstenilenin doğrulanması ürün NS gerekli , spesifik olmayan bir eksikliğin doğrulanmasını içerir Ürün:% s ve primer dimerler. Temiz Reaksiyon karışımının yukarısı da gerekli müteakip reaksiyonlara müdahale edebilecek ve okunamayan bir diziye yol açabilecek birleşik olmayan primerleri ve dNTP'leri çıkarmak için.

Ayrıca PCR ürünlerinin saflaştırılması neden gereklidir?

Gerek PCR ürünlerini arındırın ligasyonun başarısını optimize etmek için kullanılmayan primerlerden, nükleotidlerden ve enzimlerden kurtulmak, ürün ile ilgili PCR . NS arındırmak NS PCR ürünleri , boyut dışlama kromatografisi kullanılır.

Ayrıca, kısıtlama endonükleaz sindiriminden önce PCR ürünlerini saflaştırmalı mısınız? Çoğunluğu kısıtlama enzimler aktiftir PCR tamponlar. Klonlama uygulamaları için, arıtma ile ilgili Sindirim öncesi PCR ürünleri NS gerekli içinde bulunan aktif termofilik DNA polimerazı uzaklaştırmak için PCR karışım. DNA polimerazlar, bölünmüş DNA'nın uçlarını değiştirebilir ve ligasyon verimini azaltabilir.

İnsanlar ayrıca, dizileme için PCR ürünlerini nasıl hazırlıyorsunuz?

PCR Ürünlerinin Doğrudan Sıralanması

  1. Doğru parçayı büyüttüğünüzden EMİN olun.
  2. Tüm artık PCR primerlerini ve birleşik olmayan nükleotidleri çıkarmalısınız.
  3. PCR primerleri aynı zamanda sıralama primer(ler)i olacaksa, koşullarımıza uygun olduklarından emin olun.
  4. Numuneyi aşırı konsantre etmeyin!

PCR ürününü sıralayabilir misiniz?

doğrudan sıralama ile ilgili PCR Ürünleri . sıralama sadece kullanır bir kullanılan iki yerine astar PCR . Yaparsan her iki primeri de çıkarmayın, olacaksın iki tane al diziler okunamayan birbiri üzerine bindirilmiş. bir PCR için astar sıralama Şartlarımıza uygun olduğu sürece.

Önerilen: